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RPMI 1640細胞培養液的配制
【注意事項】 每次配液時，需要的其他輔助性液體（Hanks，胰蛋白酶消化液，PBS，抗生素溶液等）也可以同時配制，分別過濾。 市售小牛血清使用前都應該滅活（56℃，30min），以消除補體活性。動物血清個體差異大，故而每一批血清都進行嚴格檢測，同時進行無菌試驗。血清應該為淡黃色，透明，無溶血，無沉淀，滅活后顏色稍深。生化檢測總蛋白含量3.5~4.5g/100ml，球蛋白不高于2g／100ml。選定一個效果較好的批號后，可一次多購該批號的血清，保證試驗條件的穩定。 由于市售小牛血清pH未知，但大多偏酸。試驗中加入小牛血清后，培養基的pH可能還會變化，故亦可先加入小牛血清后調pH值。但此種方法過濾較困難，只適于正壓過濾。 培養液配好后，應先抽取少許放入培養瓶內，于37℃溫箱內置24～48hr，以檢測培養液是否有污染。 每次配液量以兩周左右為宜，一次配液不要太多，防止營養成分（主要為谷氨酰胺）損失，造成實驗繁瑣或者污染。
細胞培養基DMEM的配制（初學） 2010.07.02 細胞培養基是由合成培養和小牛血清配制而成。合成培養基有商品出售，它是根據細胞生長的需要按一定配方制成的粉狀物質。其主要成分是氨基酸、纖維素、碳水化合物、無機離子和其它輔助物質。它的酸堿度和滲透壓與活體內細胞外液相似。小牛血清含有一定的營養成分，更重要的是它含有細胞生長所必須的生長因子、激素、貼附因子等，這是合成培養基無法替代的。此外它還能中和有毒物質的毒性。故一般體外培養細胞時要加入一定量的小牛血清（１0%）。
【儀器、材料和試劑】
1．儀器：蠕動泵1套，濾器，高壓蒸汽滅菌鍋，磁力攪拌器，pH計。
2．材料：3000mL錐形瓶，250mL或500mL培養液瓶，0.22mm的微孔濾膜。
3．試劑：雙蒸水，小牛血清，合成培養基（DMEM），NaHCO3。
【操作步驟】
1．過濾器的準備和安裝
（1）清洗好過濾器，干燥
（2）將一張0.22mm的微孔濾膜在DDW中浸泡后放入濾器，注意不要有氣泡。
（3）用布或報紙包裝好，121℃ 30min進行高壓蒸汽滅菌處理。
（4）在超凈臺內安裝好過濾裝置，準備過濾。
2．合成培養基的配制 DMEM 13.5g NaHCO3 3.7g HEPES 2.38g DDW溶解 10M的NaOH調pH為7.5 定容1L
(1)將干粉型培養基DMED溶于300ml的三蒸水中，再用300ml水沖洗包裝內面兩次，倒入培養液中，以保證所有干粉都溶解成培養液。
(2)加入NaHCO3 3.7g HEPES 2.38g。磁力攪拌器攪拌。*溶解即可，不易在空氣中攪拌過長時間，大量的CO2融入會影響培養基的pH
（3）正常情況下用10M的NaOH調pH為7.5。
（4）過濾除菌。于超凈臺中濾器過濾。
（5）濾前、濾后分別取10ml的培養基于15ml的離心管中，置37℃ 24h，檢測是否無菌。
（6）檢測無污染后，2℃－8℃下避光保存。
（7）使用時加入加抗生素：zui終濃度青霉素為100U/ml，鏈霉素100μg/ml。一般市售青霉素為80萬U/瓶，將其溶解在4ml體積內，每1000ml培養液中加0.5ml，即成zui終濃度為100U/ml。市售鏈霉素為100萬U/瓶，將其溶解5ml體積內，也是每1000ml加0.5ml，使其zui終濃度為100μg/ml。
（8）加入小牛血清 市場上出售的小牛血清一般做了滅菌處理，但在使用前還應做熱滅活處理，即通過加熱的方法破壞補體。 將血清放入56℃水浴中30min，其間要不時輕輕晃動，使受熱均勻，防止沉淀析出。根據培養基量加入小牛血清，使其終濃度為10%。 每次配液量以使用兩周左右的量為宜。一次配液不要太多，一是營養成分有損失，二是容易污染。
