K562細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

產(chǎn)品名稱：K562細(xì)胞

中文名稱：人慢性髓原白血病細(xì)胞

種屬：人

來源： 慢性髓細(xì)胞白血病；女性

培養(yǎng)條件：IMDM

生長狀態(tài)：懸浮

2017年新學(xué)期，迎著朝陽，放飛夢想，久別重逢，相聚一堂，百尺竿頭，更進(jìn)一步，學(xué)無止境，自立自強，為國爭光，慧穎細(xì)胞庫為答謝各位莘莘學(xué)子的厚愛，在新學(xué)期開學(xué)之際，將慧穎細(xì)胞庫1223株細(xì)胞特惠出售，更多活動詳情，請致電市場部！

K562細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

有的客戶在COS-1細(xì)胞復(fù)蘇傳代后發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞狀態(tài)不好，形態(tài)不佳，透光度亦不好，如果老師認(rèn)為復(fù)蘇過程沒問題，那就核實下是否是從液氮拿出直接放入溫水，還有培養(yǎng)箱，二氧化碳濃度，培養(yǎng)基、PH值等環(huán)節(jié)。要么加高濃度FBS 15-20%，看看能否幫助貼壁，當(dāng)然也需要考慮血清問題，還有確信拿來的細(xì)胞沒問題。

有的老師認(rèn)為首先應(yīng)該懷疑凍存，實際上復(fù)蘇出問題的可能非常小，因為操作簡單，而且死板。

1、確認(rèn)下凍存的時候是不是消化的時間過長，這是一般人所注意不到的，即使書上也不講這個問題，但我們因為這個問題就兩種肺癌細(xì)胞和一種肝癌細(xì)胞專門做過試驗，這個是絕大部分人細(xì)胞復(fù)不活的一個原因。太長的消化時間會讓細(xì)胞復(fù)蘇時失去貼壁能力，表現(xiàn)為先貼后死，原因是在你復(fù)蘇的時候細(xì)胞已進(jìn)入凋亡程序，不可逆轉(zhuǎn)的死亡。

2、老師的凍存液好不好，是什么，甘油還是DMSO，質(zhì)量非常重要，否則也會死亡。

3、老師的凍存液的量加的是不是太多，ATCC推薦是不超過7%，大于5%，太多也不好。

4、老師在凍存的時候是不是把DMSO混均勻，這個有一些影響，但不算太大。

5、老師的凍存是否按部就班，就是所溫度梯度是不是把握嚴(yán)格，很多人容易忘卻這個事情，因為這個東西流程長。

6、如果老師的細(xì)胞污染，你是否能很快看到。從這個角度講建議去除離心這步。

7、老師的細(xì)胞在凍存前是否過密。

還有，我們是不贊成孵箱污染這個概念的，所有在一個孵箱里的細(xì)胞都污染一個細(xì)菌的話，這個細(xì)菌是源于孵箱的，但這不代表孵箱污染，因為孵箱無論你如何處理都有大量的細(xì)菌，問題在操作。我們的細(xì)胞房不換拖鞋，非常臟，別人的細(xì)胞都污染，很多細(xì)胞都污染到絕種，但我們的只污染一次（兩年內(nèi)只有兩瓶），那次是因為當(dāng)初有某高校組織學(xué)生參觀我們細(xì)胞庫給動過了，我們每次細(xì)胞擺放順序都是記住的。如果老師老懷疑孵箱污染，我們會認(rèn)為老師的復(fù)蘇培養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗還需要進(jìn)一步熟練和積累經(jīng)驗。

每次污染的原因都要盡可能的找，以后就不犯同樣的問題，這個很重要，不能靠猜。

K562細(xì)胞 細(xì)胞株復(fù)蘇失敗原因分析

MN60    人B細(xì)胞白血病細(xì)胞  人  B細(xì)胞白血病；男性   1640    懸浮       

COLO-1  人角質(zhì)形成層細(xì)胞    人  角質(zhì)形成層  DMEM    貼壁       

Hut-102 人皮膚T淋巴瘤細(xì)胞  人  皮膚；T淋巴瘤   1640    懸浮       

HPMC    人腹膜間皮細(xì)胞  人  腹膜間皮細(xì)胞    1640    貼壁       

SK-N-FI     人腦神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞    人  神經(jīng)母細(xì)胞瘤；男性  DMEM    貼壁       

OCI-LY1 人彌漫大B淋巴瘤細(xì)胞    人  彌漫大B淋巴瘤；男性    IMDM    懸浮       

hRPE    人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞    人  視網(wǎng)膜；色素上皮細(xì)胞    1640    貼壁       

SG231   人膽管上皮癌細(xì)胞    人  肝內(nèi)膽管癌；男性    1640    貼壁   

CCLP1   人膽管癌細(xì)胞    人  肝內(nèi)膽管癌；女性    DMEM    貼壁   

hESC    人子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞  人  子宮內(nèi)膜；間質(zhì)細(xì)胞；女性    EMEM    貼壁   

BAr-T   人食管上皮細(xì)胞  人  食管；HGNC-TERT轉(zhuǎn)化；男性   DMEM    貼壁   

HIBEC   人肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞 人  肝內(nèi)膽管；上皮細(xì)胞 1640    貼壁   

KYSE180 人食管鱗癌細(xì)胞  人  食管鱗癌；男性  1640    貼壁   

melan-a 小鼠黑色素細(xì)胞  小鼠    黑色素細(xì)胞；自發(fā)永生；C57BL/6   1640    貼壁   

RBSMC   大鼠腦動脈平滑肌細(xì)胞    大鼠    腦動脈；平滑肌  DMEM    貼壁   

 H4IIEC3    大鼠肝癌細(xì)胞    大鼠    肝癌；雄性；AxC DMEM    貼壁   

LIPF155C    人膽管癌細(xì)胞    人  膽管癌  DMEM/1640   貼壁   

LIPF178C    人膽管癌細(xì)胞    人  膽管癌  DMEM/1640   貼壁   

SW1783  人腦星形膠質(zhì)瘤細(xì)胞  人  間變性星形細(xì)胞瘤；男性  DMEM    貼壁   

LICCF   人肝內(nèi)膽管癌細(xì)胞    人  肝內(nèi)膽管癌  1640    貼壁   

QGY7703 人肝癌細(xì)胞  人  肝癌；女性  1640    貼壁   

HCCLM6  人肝癌細(xì)胞  人  肝癌    1640    貼壁   

ST2 小鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞    小鼠    基質(zhì)；BALB/c    DMDM    貼壁   

K7M2-WT 小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞  小鼠    骨肉瘤；肺轉(zhuǎn)移；雌性；BALB/c    EMEM    貼壁   

WB-F344 大鼠肝上皮樣干細(xì)胞  大鼠    肝；自發(fā)永生；Fischer 344   DMEM    貼壁   

Hs683   人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞  人  少突神經(jīng)膠質(zhì)瘤；男性    DMEM    貼壁   

SV40-MES-13 小鼠腎小球系膜細(xì)胞  小鼠    腎小球系膜；SV40轉(zhuǎn)化    DMEM    貼壁   

C8166   人T淋巴細(xì)胞白血病細(xì)胞  人  T淋巴細(xì)胞白血病；HTLV-1轉(zhuǎn)化    1640    懸浮   

HSAEC1-KT   人肺小氣道上皮細(xì)胞  人  肺；HGNC-TERT轉(zhuǎn)化；男性 DMEM    貼壁   

L-540   人霍奇金淋巴瘤細(xì)胞  人  霍奇金淋巴瘤；女性  1640    懸浮   

rRMECs  大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞    大鼠    視網(wǎng)膜微血管；內(nèi)皮細(xì)胞  DMEM    貼壁   

GC9811-P    人胃癌腹膜高轉(zhuǎn)移細(xì)胞    人  胃癌    1640    貼壁   

HepG2.2.15  穩(wěn)轉(zhuǎn)HBV病毒HepG2細(xì)胞  人  肝癌；穩(wěn)轉(zhuǎn)HBV病毒  IMDM    貼壁   

BSC40   非洲綠猴腎細(xì)胞  非洲綠猴    腎；自發(fā)永生    DMEM    貼壁   

SNU-5   人胃癌細(xì)胞  人  胃癌；女性  1640    懸浮   

RASMCs  大鼠氣道平滑肌細(xì)胞  大鼠    氣道平滑肌  DMEM    貼壁   

OSK-1   小鼠誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞(iPS細(xì)胞)   小鼠    誘導(dǎo)型多能干細(xì)胞    DMEM    貼壁   

B35 大鼠神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞    大鼠    神經(jīng)母細(xì)胞瘤；BDIX  DMEM    貼壁   

HCE-2 [50.B1]   人角膜上皮細(xì)胞  人  角膜上皮；Ad12-SV40；男性   1640    貼壁    為了應(yīng)付季節(jié)變化CV-1細(xì)胞運輸、培養(yǎng)帶來的真菌等污染問題，公司特做以下建議：

1）細(xì)胞的運輸、轉(zhuǎn)移過程中，請勿打開自封袋；拿放細(xì)胞時請持瓶體，切勿在非無菌環(huán)球中碰觸、擰動瓶口封口膜位置

2）進(jìn)入生物安全柜前，打開自封袋拿出培養(yǎng)瓶，噴上酒精放進(jìn)操作臺（不建議使用酒精棉球擦拭），撕開封口膜后，用酒精燈外焰對瓶口燒灼一圈（3秒左右）

3）豎立培養(yǎng)瓶，擰開瓶蓋（如是貼壁細(xì)胞，請用真空泵或吸管移除原配培養(yǎng)基，切勿讓瓶口處的液體回流進(jìn)瓶內(nèi)）

4）更換為含10%-20%血清的*培養(yǎng)基，嚴(yán)格按照無菌操作要求繼續(xù)培養(yǎng)

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